2022年7月7日，中華人民共和國(guó)海關(guān)總署發(fā)布了2022年第57號(hào)公告（關(guān)于發(fā)布《進(jìn)境種用雛禽指定隔離檢疫場(chǎng)建設(shè)規(guī)范》等90項(xiàng)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的公告），其中《梨波氏盤(pán)菌果腐病菌檢疫鑒定方法》SN/T 5467-2022自2023年2月1日起實(shí)施，本文對(duì)該行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行解讀。
一、什么是梨波氏盤(pán)菌果腐病菌？
梨波氏盤(pán)菌果腐病菌Potebniamyces pyri是一種危害蘋(píng)果、梨等植物的病原菌，除了引起果樹(shù)樹(shù)皮的潰瘍或壞死外，還可以引起儲(chǔ)藏期梨果的腐爛病，據(jù)美國(guó)提供材料，該有害生物是美國(guó)梨上新發(fā)現(xiàn)的收獲后有害生物。該病目前分布于德國(guó)、英國(guó)、烏克蘭、俄羅斯、塞浦路斯、加拿大、美國(guó)的俄勒岡州和華盛頓州等地，中國(guó)無(wú)分布，在美國(guó)華盛頓州發(fā)生最為嚴(yán)重，給當(dāng)?shù)乩娴纳a(chǎn)帶來(lái)了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。2004年，Xiao等人對(duì)華盛頓州d'Anjou梨儲(chǔ)藏期病害的調(diào)查結(jié)果表明，梨波氏盤(pán)菌腐爛病是梨果儲(chǔ)藏期腐爛病的重要組成部分，大約有30%的梨腐爛病是由P. pyri引起的。該菌一旦傳入我國(guó)，將給我國(guó)的梨產(chǎn)業(yè)帶來(lái)嚴(yán)重影響。本實(shí)驗(yàn)室在2013年首批進(jìn)境的美國(guó)梨中分離到該病菌，但由于其與其他弱寄生菌復(fù)合侵染的特性，經(jīng)歷了長(zhǎng)時(shí)間的分離純化培養(yǎng)，才鑒定出該病菌。亦由于它的復(fù)合侵染特性，在檢疫過(guò)程中非常容易被忽略，發(fā)生漏檢的現(xiàn)象，因此研發(fā)其相應(yīng)的檢測(cè)方法或通過(guò)查閱已報(bào)道文獻(xiàn)進(jìn)行方法驗(yàn)證，以形成梨波氏盤(pán)菌果腐病菌的檢測(cè)的推薦性方法，并形成包括分離培養(yǎng)、檢測(cè)技術(shù)、基本信息介紹在內(nèi)的《梨波氏盤(pán)菌果腐病菌檢疫鑒定方法》的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)于我國(guó)口岸對(duì)于該病菌的檢疫工作具有重大意義。
二、該標(biāo)準(zhǔn)的適用范圍：
本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了梨波氏盤(pán)菌果腐病菌的檢疫鑒定方法。
本標(biāo)準(zhǔn)適用于進(jìn)境鮮梨、蘋(píng)果及相關(guān)寄主植物產(chǎn)品攜帶的梨波氏盤(pán)菌果腐病菌的檢疫鑒定。
三、如何檢測(cè)梨波氏盤(pán)菌果腐病菌？
1.癥狀觀察：仔細(xì)檢查果蒂、果萼及果實(shí)表面是否有腐爛病斑、菌絲、分生孢子器等。
2.病菌的分離、純化及形態(tài)觀察：果實(shí)樣品，采用進(jìn)行 75 % 酒精表面擦拭消毒，快速過(guò)火，切開(kāi)去表皮，在病健交界處取樣，切成 4 × 4 mm 小塊。置于 PDA 平板上，20 ℃ 條件下 20 d 后進(jìn)行分生孢子器觀察。
3.PCR 檢測(cè)：采用引物 ITS1/ITS4 可擴(kuò)增出約 550 bp的特異性條帶，Bt-LEV-Up4 / Bt-LEV-Lo1 擴(kuò)增后可得到 664 bp的條帶，將條帶回收測(cè)序，進(jìn)行 Blast 比對(duì)，應(yīng)與Potebniamyces pyri的序列同源性達(dá) 99 % 以上。
四、該標(biāo)準(zhǔn)的特點(diǎn)：
1. 方便、快速，操作簡(jiǎn)便
本標(biāo)準(zhǔn)建立了梨波氏盤(pán)菌果腐病菌的分離培養(yǎng)方法和分子生物學(xué)檢測(cè)方法，是典型的傳統(tǒng)形態(tài)學(xué)鑒定與分子生物學(xué)鑒定相結(jié)合的病原真菌鑒定方式，通過(guò)方法的建立，可指導(dǎo)口岸一線人員快速對(duì)疑似目標(biāo)物進(jìn)行定性，大大縮短了無(wú)標(biāo)準(zhǔn)方法時(shí)的大量摸索工作。
2. 廣泛適用性
該方法所涉及的檢測(cè)方法及設(shè)備均為口岸實(shí)驗(yàn)室常規(guī)設(shè)備，操作簡(jiǎn)便、快捷，技術(shù)難度不高，且可同批次處理大量樣品。為口岸實(shí)驗(yàn)室在進(jìn)境植物產(chǎn)品中的檢測(cè)工作提供了便捷。
供稿單位：綜合業(yè)務(wù)司、大連海關(guān)
